Preparazione del Laboratorio
La preparazione dell'esperimento di estrazione del DNA dovrebbe iniziare almeno 36 ore prima del periodo di laboratorio. Forniamo il materiale in gruppi da quattro studenti, garantendo l'accesso a:
- 4 provette chiuse contenenti E. coli, etichettate "E. coli".
- 4 bastoncini di vetro per arrotolare il DNA.
- 4 provette chiuse contenenti shampoo trasparente.
- 1 provetta di etanolo al 95%, etichettata "Etanolo".
- 1 penna Sharpie.
- Opzionale: 4 stuzzicadenti, se si utilizza un ammorbidente per carne.
Ogni gruppo di quattro studenti avrà bisogno anche di una pipetta Pasteur, copie delle istruzioni di laboratorio e, opzionalmente, un contenitore con abbastanza ammorbidente per carne da condividere.
Il docente dovrà avere a disposizione per l'intera classe una bottiglia di E. coli, una piastra riscaldante con temperatura regolabile, una bacinella quadrata, un termometro e portaprovette sufficienti.
Preparazione della Soluzione di E. coli
Passo 1: Preparazione del brodo di Luria (LB)
Utilizzando il premix LB:
- Pesare 25 mg di premix LB/ml di acqua distillata.
- Sterilizzare per autoclavazione o altri metodi.
- Raffreddare e conservare in frigorifero.
Utilizzando ingredienti separati:
- Pesare 5 mg di estratto di lievito/ml di acqua distillata.
- Aggiungere 10 mg di NaCl/ml d'acqua e 10 mg di Tryptone/ml.
- Sterilizzare e conservare.
Passo 2: Preparazione della soluzione di E. coli
Portare il LB sterilizzato a temperatura ambiente. Inoculare l'E. coli sterilmente utilizzando un'ansa inoculatrice o uno stuzzicadenti sterilizzato. Incubare a 37°C per almeno 24 ore.
Preparativi del Giorno del Laboratorio
Disporre i materiali sui banchi del laboratorio. Creare un bagno d'acqua calda a 55-60°C.
Istruzioni per gli Studenti
Passo 1: Soluzione di Detergente
- Versare la soluzione di E. coli nel detergente.
- Mescolare delicatamente e riscaldare a 55-60°C per 10 minuti.
Passo 2: Ammorbidente (Opzionale)
- Aggiungere due stuzzicadenti di ammorbidente, mescolare e riscaldare per ulteriori 20 minuti.
Passo 3: Aggiunta di Alcool
- Aggiungere alcool freddo creando uno strato di circa 1 cm sopra la soluzione.
- Lasciare riposare senza agitare per 2-3 minuti, permettendo alla DNA di precipitare.
Passo 4: Estrazione della DNA
- Quando la DNA appare come una sostanza simile al muco bianco, spoolarla su un bastoncino di vetro o pipetta riscaldata.
Pulizia Dopo il Laboratorio
Autoclavare la soluzione di E. coli non utilizzata. Versare il DNA isolato nel lavandino. Lavare e conservare le provette e gli attrezzi. Riutilizzare l'ammorbidente rimasto.
Con questa guida completa, garantiamo un'esperienza di estrazione del DNA impeccabile e educativa per gli studenti, offrendo dettagli e chiarezza passo dopo passo.